intronbio 犬瘟熱病毒診斷試劑盒 

LiliF™ Canine Distemper virus Ag rapid test kit

LiliF™犬瘟熱病毒Ag快速檢測試劑盒 

產(chǎn)品信息

背景資料

犬瘟熱是由副粘病毒科（一種導致人類麻疹，腮腺炎和細支氣管炎的同一病毒家族）的單鏈RNA病毒引起的。這種疾病通過吸入傳染性很強，50％的時間都是致命的。盡管在許多地區(qū)廣泛接種疫苗，它仍然是狗的主要疾病，并且是犬傳染病死亡的主要原因犬瘟熱（有時被稱為犬的硬梆病）影響多種動物家族，包括家養(yǎng)和野生物種。狗，土狼，狐貍，熊貓，狼，雪貂，臭鼬，浣熊和大型貓科動物，還有鰭足類動物，一些靈長類動物和其他各種物種。

LiliF CDV Ag快速試劑盒是一種側(cè)流式免疫色譜分析試劑盒，用于快速和定性檢測犬體內(nèi)分泌物中的犬瘟熱病毒抗原。

原理

有可能的使用

• 檢測犬瘟熱病毒

解釋

套件內(nèi)容

犬瘟病毒百科

犬瘟--亦稱犬瘟熱，屬于病原性病毒。主要侵犯狗科、鼬科動物。屬于副粘液病毒。感染后潛伏期短，死亡率約50%。在雞胚成纖維細胞、狗腎細胞的培養(yǎng)細胞中生殖其減毒的病毒可用為活疫苗。 研究犬瘟病毒的生存能力和環(huán)境，加強對犬病毒傳播途徑管理與預防。

中文名

犬瘟病毒

外文名

canine distemper virus（CDV）

亦    稱

犬瘟熱

屬    于

病原性病毒

癥    狀

感染后潛伏期短，死亡率約50%

犬瘟（亦稱犬瘟熱）屬于病原性病毒。主要侵犯狗科、鼬科動物。屬于副粘液病毒。病毒粒子的直徑為115—160毫微米。鄧金（G．W．Dunkin）和萊德勞（P．P．Laidlaw）首先分離成功。感染的狗（尤其是幼狗）在4—5天的潛伏期后出現(xiàn)發(fā)熱，流淚，流鼻涕，嘔吐，腹瀉，便粘液，有時有抽風、痙攣等癥狀。氣管、膀胱、膽道粘膜細胞內(nèi)可證明有包含體。

犬瘟病毒染色切片

死亡率約50%。在雞胚成纖維細胞、狗腎細胞的培養(yǎng)細胞中生殖其減毒的病毒可用為活疫苗。

犬瘟病毒模式圖

醫(yī)用狗貓犬瘟病毒疫苗

環(huán)境生存

1. 犬瘟病毒的環(huán)境生存力不強，常溫干燥環(huán)境下僅能存活幾個小時，在低溫（零上幾度）、陰暗環(huán)境下可以存活數(shù)周，在冷凍避光環(huán)境下可存活數(shù)年。

進口的犬瘟病毒疫苗

2. 常規(guī)消毒清洗即可滅活。

3. 主要傳染途徑是吸入病犬咳出的懸浮微粒，以及接觸新鮮的分泌物（30分鐘內(nèi)），因此基本上是要與病狗近距離接觸才會發(fā)生傳染。 ^[1] 

病理研究

概述

犬瘟熱(CD)是世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生的一種犬的急性、高接觸性的病毒傳染病，其病原為犬瘟熱病毒(CDV)，它于1905年報道，隸屬于副黏病毒科麻疹病毒屬，其自然宿主包括大部分的食肉目動物。它以早期雙相熱型、急性鼻卡他及隨后的支氣管炎、卡他性肺炎、嚴重的胃腸炎和神經(jīng)癥狀為特征，有些患病動物的鼻和足墊還表現(xiàn)過度角化。它是一種傳染性強，臨床癥狀多樣，容易繼發(fā)細菌和其他病毒的混合感染或繼發(fā)感染，發(fā)病率高達80%，患病動物在康復后還易留有麻痹、抽搐、癲癇樣發(fā)作等后遺癥。常規(guī)免疫接種在正常情況下是一種高度有效的預防保護措施，但據(jù)報道，犬瘟熱在德國、法國、日本、美國和芬蘭等國家常規(guī)免疫執(zhí)行很好的地區(qū)也會有不同程度的流行，這表明預防接種過的犬也可能發(fā)病，而發(fā)病機制可能存在新的變化。

犬瘟病毒外觀

流行病范圍

CDV宿主廣泛，犬科(犬、狐貍、豺、狼等)、鼬科貂、雪貂、黃鼬、白鼬、貉等)和浣熊科(海豹、熊貓、浣熊、白鼻熊等)、貓科(虎、豹、獅)動物均易感，但犬是主要的宿主，純種犬比土種犬具有更明顯的易感性，幼小動物比成年動物更易感。在狐、水貂等皮毛獸養(yǎng)殖場，犬瘟熱可自然流行，雪貂自然發(fā)病的死亡率常達100%。現(xiàn)已有報道證實在患Pagets疾病的病人組織中檢出了犬瘟熱病毒核酸。由此可見，犬瘟熱的感染范圍在不斷地擴大。

傳染源為患病動物和帶毒動物。病毒存在于患病動物和帶毒動物的鼻汁、淚液、血液、腦脊髓液、淋巴結(jié)、心包液、胸水，腹水等中，通過眼鼻分泌物、唾液、尿液和糞便向外排毒。有些病犬臨床癥狀恢復后可長時間向外界排毒。

傳播途徑主要是呼吸道，其次是消化道。胎兒可通過胎盤屏障而感染，造成流產(chǎn)和死胎。本病一年四季都可發(fā)生，但以冬季和早春季節(jié)多發(fā)。近年來，隨著養(yǎng)犬業(yè)的發(fā)展，犬的交流調(diào)運頻繁，發(fā)病周期性不再明顯。

發(fā)病機制

自然感染途徑主要是經(jīng)上呼吸道。CDV經(jīng)鼻、咽和上呼吸道侵入機體后首先在其附近的淋巴結(jié)和扁桃體中增殖，24h內(nèi)在組織巨噬細胞中增殖并擴散至整個細胞，從局部淋巴管到達扁桃體和支氣管淋巴結(jié)。感染后2~4d病毒在扁桃體和咽后淋巴結(jié)、支氣管淋巴結(jié)中繁殖。4~6d后CDV在脾臟淋巴濾泡、胃及小腸的固有層、腸系膜淋巴結(jié)和肝臟星形細胞內(nèi)增殖，動物表現(xiàn)為初的體溫升高和白細胞減少。感染后周出現(xiàn)病毒血癥，借助于血液循環(huán)，CDV散布到全身的淋巴器官、骨髓和上皮結(jié)構(gòu)的固有膜，身體的所有分泌物中開始向外排毒。50%的犬于感染后迅速產(chǎn)生抗體，8~9d時即可測出。在感染后8~9d病毒進一步擴散到上皮組織和CNS組織，身體的所有分泌物中開始向外排毒，甚至處于亞臨床感染階段的犬也開始排毒。免疫水平良好的犬感染后14d具有了足夠的CDV抗體，細胞介導的細胞毒性從大部分組織中清理病毒，動物不表現(xiàn)犬瘟熱的臨床癥狀，免疫水平差的犬在感染后9~14d病毒擴散到其組織，包括皮膚、內(nèi)分泌腺、胃腸道上皮、呼吸道上皮、泌尿生殖道上皮等，呈現(xiàn)出病毒侵害多系統(tǒng)的臨床癥狀。CDV在腦組織中主要表現(xiàn)為對血管壁細胞的激活過程繼而引起神經(jīng)膠質(zhì)細胞反應(yīng)，出現(xiàn)脫髓鞘性腦炎，在感染后3~4周時出現(xiàn)神經(jīng)癥狀而死亡。

出現(xiàn)癥狀

CD的臨床癥狀決定于毒株的毒力、環(huán)境、宿主年齡及免疫水平等各種因素。

（一）多系統(tǒng)癥狀 溫和型臨床癥狀比較常見，出現(xiàn)精神沉郁、厭食、雙相熱和呼吸道癥狀。雙相熱表現(xiàn)為開始體溫升高至40℃左右，持續(xù)8~18h，經(jīng)1~2d無熱期后，體溫再度升高至40℃左右，3d~6d，出現(xiàn)暫時的發(fā)熱和淋巴細胞減少。呼吸道癥狀初表現(xiàn)為漿液性鼻汁，以后發(fā)展為粘液膿性并伴隨咳嗽和呼吸困難。同時，病毒血癥可能導致全身性的淋巴器官感染，包括脾臟、胸腺、淋巴結(jié)、骨髓、黏膜相關(guān)淋巴組織、胃腸道黏膜固有層巨噬細胞和肝臟枯否氏細胞。

（二）皮膚損傷 可見到水泡性和化膿性皮炎，腹下皮膚常見有米粒大小的紅色丘疹或化膿性丘疹，皮屑大量脫落，唇、眼、肛門皮膚增厚，鼻鏡龜裂，母犬外陰腫脹。病程稍長者，足墊增厚、變硬甚至干裂，這是臨床診斷的重要指征之一。

（三）神經(jīng)癥狀 神經(jīng)癥狀是該病的特點之一，通常在病的恢復期后7~21d出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，但也有部分犬剛開始發(fā)熱時就表現(xiàn)出來，或者在嚴重的全身癥狀出現(xiàn)后伴隨出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。癲癇發(fā)作、四肢輕癱或后軀輕癱、肌痙攣、共濟失調(diào)是臨床上經(jīng)常看到的神經(jīng)癥狀。神經(jīng)癥狀的變化決定于病毒侵害神經(jīng)系統(tǒng)的部位，大腦受損表現(xiàn)為癲癇、好動、轉(zhuǎn)圈和精神異常；中腦、小腦、前庭和延髓受損表現(xiàn)為運動或站立姿勢異常；脊髓受損表現(xiàn)為共濟失調(diào)、反射異常；腦脊膜發(fā)炎表現(xiàn)為感覺過敏、頸背部肌肉強直。痙攣多見于顏面部、唇部和眼瞼。CDV感染可能經(jīng)過連續(xù)的神經(jīng)系統(tǒng)傳播進入而引起腦灰質(zhì)和白質(zhì)疾病，主要由病毒株決定。

病理變化

（一）剖解變化 CDV為泛嗜性病毒，對上皮細胞和淋巴細胞有特殊的親合力，因此病變分布非常廣泛。部分病例皮膚可出現(xiàn)水皰性或膿包性皮炎，有些病例足底表皮角質(zhì)增生；呼吸道黏膜有卡他性或濃性滲出液；消化道可見卡他性腸炎、胃粘膜出血、小腸前段出血；部分病犬脾臟和膀胱粘膜出血；在無并發(fā)癥的情況下胸腺萎縮且可能呈膠凍狀；腎上腺皮質(zhì)變性；死于神經(jīng)癥狀的病犬，腦膜充血、出血，腦室擴張，腦脊髓液增多。

（二）組織病理學變化 陳建國等報道，對病犬進行組織學檢查可以發(fā)現(xiàn)，在很多組織細胞中有嗜酸性的核內(nèi)和胞漿內(nèi)包涵體，呈圓形或橢圓形，直徑1~2μm。脾竇擴張淤血、出血，白髓和紅髓淋巴細胞明顯減少。肺泡壁增厚，毛細血管擴張、充血，肺泡腔內(nèi)充滿大量漿液、紅細胞、巨噬細胞、中性白細胞、脫落的肺泡上皮細胞，在肺小葉的局部區(qū)域可見肺泡壁破裂發(fā)生肺氣腫，肺小葉間隔增寬，細支氣管壁炎性增厚。淋巴結(jié)被膜疏松、水腫、增厚，副皮質(zhì)淋巴竇和髓質(zhì)淋巴竇擴張，其內(nèi)充滿大量漿液、巨噬細胞、淋巴細胞等。腸上皮細胞變性、壞死、脫落，腸腔內(nèi)充滿大量的黏液、壞死脫落的上皮細胞、中性白細胞、單核細胞等，腺上皮粘液變形，杯狀細胞增多，有嗜酸性白細胞反應(yīng)，黏膜下層水腫、增厚，毛細血管擴張充血、出血。扎西英派等報道脊髓灰質(zhì)中神經(jīng)細胞腫脹，染色質(zhì)溶解，神經(jīng)細胞周圍水腫，白質(zhì)有大量空泡，因脫髓鞘而呈海綿狀變化。

醫(yī)學診斷

根據(jù)流行病學資料和臨床癥狀，可以作出初步診斷。包涵體檢查是診斷犬瘟熱的輔助方法，后的確診需要依靠病毒的分離，病毒特異性抗原或抗體的檢測和特異性核酸檢測。

（一）包涵體檢查 包涵體檢查是診斷犬瘟熱的重要輔助方法。包涵體主要存在于膀胱粘膜、支氣管上皮細胞和腎盂上皮細胞內(nèi)。包涵體多數(shù)在細胞質(zhì)內(nèi)，1個細胞可能有1～10個多形包涵體，呈圓形或橢圓形。

（二）電鏡及免疫電鏡檢查 這是檢查確定CDV感染簡便快速的方法，制備電鏡樣品方法有：磷鎢酸（PTA）負染色法、液相免疫電鏡和超薄切片法。電鏡觀察的宜病料是糞便，該診斷法從制樣到鏡下觀察，整個過程只需要2～3h，可用于快速檢查CDV粒子。

（三）病毒的分離培養(yǎng) CDV是具有囊膜的病毒，結(jié)構(gòu)較脆，易被光和熱滅活，對環(huán)境的抵抗力非常弱，因此病毒的分離成功率很低。病料采樣部位、時間、樣品的處理、病程類型、發(fā)病動物的抗病毒抗體的水平等因素對病毒分離成功與否有一定的影響，但主要的是分離病毒的載體是否敏感和有效。閆喜軍報道了我國犬瘟熱病毒強毒株HBF-1培育成功，對研究犬瘟熱發(fā)病機理以及犬瘟熱疫苗的研究具有重要意義。

（四）動物回歸試驗 雪貂易感，死亡率接近100%，任何途徑接種后均可在8～14d內(nèi)死亡，或者選用斷奶15d后的幼犬，皮下、肌肉或腹腔注射10倍稀釋病料懸液3～5ml。也可在雞胚、小鼠、倉鼠中適應(yīng)生長，但敏感性較低。

（五）血清學診斷 劉潤珍等用特異CD高免血清與金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）致敏，用協(xié)同凝集試驗檢測CDV，僅3～5min就可獲得診斷結(jié)果。吳曙光等用CDV雞胚成纖維細胞（CEF）弱毒疫苗免疫綿羊制備瓊脂擴散抗體，用病貉肝臟制備瓊脂擴散抗原，建立了瓊脂擴散試驗方法。與瓊脂擴散試驗相比較檢出率提高20%。

ELISA可用于評估犬瘟熱的免疫和檢測犬瘟熱病毒。Soma T等[24]對比免疫過氧化物酶染色和抗體中和試驗檢測抗體效價，結(jié)果顯示：免疫過氧化物酶染色可以檢測到感染早期低水平的抗體。袁書智等應(yīng)用直接熒光抗體染色法對CDV檢測，可作為CDV是否感染的指標以及CD生前和死后診斷方法之一。Oyedele O I等建立了蝕斑減少中和法，評價疫苗接種效果和幼犬感染CDV的危險性。蘇建青利用雙抗體夾心的原理，建立了犬瘟熱病毒膠體金免疫層析診斷試紙條。 ^[2] 

（六）分子生物學診斷王宏俊等采用地高莘標記的cDNA為探針建立核酸探針檢測CDV的方法，該方法特異性強、靈敏度高（0.1pg），臨床初步應(yīng)用結(jié)果表明該方法*使用于臨床檢測。Frisk A L等用RT-PCR方法檢測臨床疑似病例樣品中的犬瘟熱病毒核衣殼蛋白基因，實驗結(jié)果顯示：盡管所選取的引物的位置對RT-PCR的敏感性有很大的影響，但是這種核酸檢測系統(tǒng)在對犬瘟熱的生前診斷中表現(xiàn)出高度的特異性和敏感性。劉彩玉等根據(jù)GenBank中犬瘟熱病毒H基因保守序列設(shè)計合成了內(nèi)(FIP，BIP)、外(F3，B3)2對引物。通過對反應(yīng)條件中內(nèi)、外引物的比例、dNTP濃度、Mg2+濃度、反應(yīng)溫度和時間等條件逐一優(yōu)化，成功建立了犬瘟熱病毒的RT-LAMP檢測方法。該方法與常規(guī)RT-PCR檢測方法相比靈敏度高100倍。

預防

在CVD的預防時，要考慮細胞免疫與體液免疫兩方面的因素。

預防CDV滅活苗或麻疹病毒疫苗都不能提供動物持久的免疫力，目前用于犬和經(jīng)濟動物的疫苗基本上是弱毒疫苗。但是弱毒疫苗的不足之處是熱不穩(wěn)定，對某些免疫缺陷幼犬和野生食肉動物的不安全性以及發(fā)生反應(yīng)等，因此，人們已開始使用新技術(shù)研制新型疫苗，包括基因工程亞單位苗、重組病毒苗以及核酸疫苗等。

母源抗體可通過初乳轉(zhuǎn)移給仔犬，幼犬母源抗體的半衰期是8.5d，多數(shù)仔犬的母源抗體在8~12周齡開始減弱，15周齡消失。另外可給犬注射犬瘟熱單克隆抗體、犬瘟熱免疫血清、免疫球蛋白、干擾素等。當血清中母源抗體下降到1：20以下時較易感，1：100以上時通常不易感，因此血清中和抗體滴度1：100是免疫接種的指示滴度[。母源抗體滴度不明的幼犬，一般初免為6周齡，二免為8~9周齡，三免為10~11周齡，以后每年接種一次。 ^[2] 

治療

編輯

根據(jù)肥西縣愛心寵物醫(yī)院張景勇醫(yī)師多年的臨床實踐，對于犬瘟熱的治療，發(fā)病初期，發(fā)病中期，發(fā)病晚期的治療方案分別采取如下措施可取得較好的療效：

犬瘟熱早期，中期治療：

消化道已受犬瘟熱病毒侵害的病犬，往往進食不好，這種情況要進行輸液支持療法，但大量輸液會引起肺水腫，故不宜多輸，一般可按照每公斤體重20－50ml進行輸液，有條件的可做血氣分析計算出需要補充的血液離子的量：

補充體能：葡萄糖或葡萄糖生理鹽水加一些常規(guī)能量用藥如ATP，輔酶A，VitminC,VitminB6,Inosine等；?

對癥治療：輸液時加一些抗生素，如氨芐西林鈉加地塞米松和利巴韋林，或其他抗生素也可以，這樣做的目的是防止繼發(fā)感染；

治療神經(jīng)炎，防止出現(xiàn)神經(jīng)癥狀（有時候神經(jīng)癥狀是預防也沒有的）：用一些含VitminB12r的藥物，如科特壯之類，VitminB1;神奇康肽對由于神經(jīng)炎導致的抽搐有一定的作用；

其它癥狀的對癥治療：如呼吸道的咳嗽，肺炎，發(fā)燒等，或者消化道的腹瀉，便血，嘔吐等，可對癥用一些常規(guī)藥物。

治療治療原則為：對癥治療，控制細菌繼發(fā)感染，維持體液平衡，增強抵抗力，控制神經(jīng)癥狀。良好的護理是治療成功的關(guān)鍵。治療CD時一定在盡早大劑量使用價免疫血清的同時，進行以防止繼發(fā)感染為中心的對癥治療與增強機體免疫功能的治療，對于表現(xiàn)出神經(jīng)癥狀的病犬，治療的意義不大，癥狀進一步惡化者，可以考慮--。

另外可配合中藥治療如：金銀花12g，連翹12g，板藍根12g，黃柏15g，黃芩12g，水牛角15g，玄參12g，生地12g，知母12g，甘草15g，水煎，1d1劑，分2次經(jīng)口給予。以上方法連用5d后，觀察病犬情況，再根據(jù)情況進行治療。

另一些新的研究報道如：Alloferon1是從麗蠅體內(nèi)分離出的活性多肽，體內(nèi)試驗結(jié)果表明對犬瘟熱病毒感染的小鼠有明顯的保護作用，有望成為犬瘟熱防治的一種新型藥物。口服苯妥英鈉與靜脈內(nèi)注射鹽酸普魯卡因聯(lián)合應(yīng)用治療神經(jīng)型犬瘟熱有良好的效果。體內(nèi)外試驗證明利巴韋林（RIB）能夠抑制麻疹病毒的復制。EICAR是利巴韋林的類似物，在抑制CDV復制方面的活性強于利巴韋林，也同樣均有濃度和時間依賴性。金絲桃素為藤黃科金絲桃屬多年生草本植物的提取物，在先毒后藥情況下可以有效抑制犬瘟熱病毒的增殖。